الرئيسيةعريقبحث

زرع الخلايا

☰ جدول المحتويات

مزرعة خلوية في طبق بتري
خلايا إبيثيلية في الزرع مصبوغة لل كيراتين (أحمر) والـحمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين (أخضر)

زرع الخلايا هي عملية يتم بها تنمية خلايا حقيقية النواة وبدائية النواة تحت ظروف مسيطرة. بصورة عامة، يدل مصطلح "زرع الخلايا" على زرع خلايا مأخوذة من كائنات متعددة الخلايا، خاصة خلايا الحيوان. التطور والطرق التأريخية لزرع الخلايا متعلقة بصورة كبيرة بزرع الأنسجة وزرع الأعضاء. ويُسمى مكان زرع الخلايا مزرعة خلايا.[1]

من الناحية العملية، يشير مصطلح "زراعة الخلايا" الآن إلى زراعة الخلايا المشتقة من حقيقيات النواة متعددة الخلايا، وخاصة الخلايا الحيوانية، على النقيض من أنواع أخرى من الثقافة التي تزرع الخلايا أيضًا، مثل زراعة الأنسجة النباتية، والثقافة الفطرية، والثقافة الميكروبيولوجية (الميكروبات). يرتبط التطور التاريخي وأساليب زراعة الخلايا ارتباطًا وثيقًا بتطور زراعة الأنسجة والأعضاء. ترتبط الفيروسية أيضًا بالخلايا كمضيفات للفيروسات.

أصبحت تقنية المختبر للحفاظ على خطوط الخلايا الحية (مجموعة من الخلايا المنحدرة من خلية واحدة وتحتوي على نفس التركيب الوراثي) المنفصلة عن مصدر النسيج الأصلي أكثر قوة في منتصف القرن العشرين.[2] [3]

أصبح زرع الخلايا الحيوانية تقنية مختبرية روتينية في الخمسينات من القرن العشرين،[4] ولكن مبدأ المحافظة على خلايا حية مفصولة عن النسيج المصدر الأصلي هي عملية اكتشفت في القرن التاسع عشر.[5]

التاريخ

طور عالم الفيزياء الإنجليزي سيدني رينجر في القرن التاسع عشر محلولاً ملحياً يحتوي على كلوريد الصوديوم والبوتاسيوم والكالسيوم والمغنيسيوم المناسب للحفاظ على عمل قلب حيواني معزول خارج الجسم. [6] في عام 1885، أزال فيلهلم رو جزءًا من صفيحة دجاج مولياري وحافظ عليها في محلول ملحي دافئ لعدة أيام، مؤسسًا بذلك مبدأ زراعة الأنسجة. [7] نشر روس غرانفيل هاريسون، الذي يعمل في كلية الطب بجامعة جونز هوبكنز، ثم في جامعة ييل، نتائج تجاربه من عام 1907 إلى عام 1910، مؤسسًا منهجية زراعة الأنسجة. [8]

تم تطوير تقنيات زراعة الخلايا بشكل ملحوظ في أربعينيات وخمسينيات القرن العشرين لدعم البحث في علم الفيروسات. سمحت الفيروسات المتنامية في مزارع الخلايا بإعداد فيروسات مُنَقَّمة لتصنيع اللقاحات. كان لقاح شلل الأطفال القابل للحقن الذي طوره جوناس سالك واحدًا من أول المنتجات التي تم إنتاجها بكميات كبيرة باستخدام تقنيات زراعة الخلايا. هذا اللقاح أصبح ممكنا بفضل أبحاث ثقافة الخلية لجون فرانكلين إندرز، توماس هاكل ويلر، وفريدريك تشابمان روبنز، الذين حصلوا على جائزة نوبل لاكتشافهم طريقة لتنمية الفيروس في مزارع خلايا الكلى القرد.

مفاهيم في ثقافة الخلايا الثديية

عزل الخلايا

يمكن عزل الخلايا من أنسجة الجسم الحي بعدة طرق. يمكن تنقية الخلايا بسهولة من الدم. ومع ذلك، فإن الخلايا البيضاء هي وحدها القادرة على النمو في المزرعة الخلوية. يمكن عزل الخلايا من الأنسجة الصلبة عن طريق هضم المكونات خارج الخلوية باستخدام الإنزيمات مثل كولاجيناز، التريبسين، أو البرونايز، قبل تحريك الأنسجة لتحرير الخلايا إلى المعلق. [9] [10] بدلا من ذلك، يمكن وضع قطع من النسيج في وسائل النمو، والخلايا التي تنمو خارج المتاحة للثقافة. تُعرف هذه الطريقة بالثقافة الزاحفة.

تُعرف الخلايا التي يتم تربيتها مباشرةً من أحد الموضوعات بالخلايا الأولية. باستثناء بعض مشتقة من الأورام، فإن معظم ثقافات الخلية الأولية لها عمر محدود.

اكتسب خط خلوي ثابت أو خلد القدرة على التكاثر إلى أجل غير مسمى إما عن طريق الطفرات العشوائية أو التعديل المتعمد، مثل التعبير الاصطناعي لجين التيلوميراز. تم تأسيس العديد من خطوط الخلايا كممثل لأنواع خلايا معينة.

الحفاظ على زراعة الخلايا الثديية

بالنسبة لغالبية الخلايا الأولية المعزولة، فإنها تخضع لعملية الشيخوخة وتتوقف عن الانقسام بعد عدد معين من التجمعات السكانية بينما تحتفظ بصفة عامة بسلامتها (موصوفة حد هايفليك).

تزرع الخلايا وتحافظ عليها في درجة حرارة مناسبة وخليط الغاز (عادة، 37 درجة مئوية، 5 ٪ CO2 لخلايا الثدييات) في حاضنة الخلايا. تختلف ظروف الزرع بشكل كبير لكل نوع من أنواع الخلايا، ويمكن أن يؤدي اختلاف الظروف لنوع معين من الخلايا إلى ظهور أنماط ظاهرية مختلفة.

بالإضافة إلى مزيج درجة الحرارة والغاز، فإن العامل الأكثر شيوعًا في أنظمة الاستزراع هو وسط نمو الخلايا. يمكن أن تختلف وصفات وسائط النمو في درجة الحموضة، وتركيز الجلوكوز، وعوامل النمو، ووجود العناصر الغذائية الأخرى. وغالبًا ما تستمد عوامل النمو المستخدمة لتكميل وسائل الإعلام من مصل الدم الحيواني، مثل مصل بقري جنيني (FBS)، مصل بقرة العجل، مصل الخيول، ومصل الخنازير. أحد مضاعفات هذه المكونات المشتقة من الدم هو احتمال تلوث الثقافة بالفيروسات أو البريونات، خاصة في تطبيقات التقنية الحيوية الطبية. الممارسة الحالية هي تقليل أو القضاء على استخدام هذه المكونات حيثما كان ذلك ممكنا واستخدام حلالة الصفيحات الدموية (hPL).[11] هذا يزيل القلق من التلوث بين الأنواع عند استخدام حلالة الصفيحات الدموية مع الخلايا البشرية. ظهرت حلالة الصفيحات الدموية كبديل آمن وموثوق به كبديل مباشر لـ مصل بقري جنيني أو مصل حيواني آخر. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام الوسائط المحددة كيميائيًا لإزالة أي أثر مصل (إنساني أو حيواني)، ولكن لا يمكن دائمًا تحقيق ذلك باستخدام أنواع خلايا مختلفة. تشمل الاستراتيجيات البديلة الحصول على دم حيواني من البلدان التي تعاني من مخاطر دنيا مثل جنون البقر/ اعتلال دماغي إسفنجي معدي، مثل الولايات المتحدة وأستراليا ونيوزيلندا، [12] واستخدام مركزات المغذيات المنقاة المشتقة من المصل بدلا من مصل الحيوانات الكاملة لزراعة الخلايا.[13]

تلعب كثافة التصفيح (عدد الخلايا لكل حجم من وسط الثقافة) دورًا حاسمًا في بعض أنواع الخلايا. على سبيل المثال، انخفاض كثافة الطلاء يجعل الخلايا الحبيبية تبدي إنتاج هرمون الاستروجين، في حين أنه عندما تكون كثافة التصفيح أعلى يجعلها تظهر كخلايا اللوتين في الدم المنتجة للبروجسترون. [14]

يمكن زراعة الخلايا إما في حالة التعليق أو اللزوجة ملتصقة. بعض الخلايا تعيش بشكل طبيعي في التعليق، دون أن تكون مرتبطة بسطح، مثل الخلايا الموجودة في مجرى الدم. هناك أيضا خطوط الخلايا التي تم تعديلها لتكون قادرة على البقاء في الاستنبات المعلقة حتى يمكن زراعتها إلى كثافة أعلى مما تسمح به شروط الالتصاق. تتطلب الخلايا الملتصقة سطحًا، مثل زراعة الأنسجة البلاستيكية أو الجزيئات الدقيقة، والتي قد تكون مغلفة بمكونات خارج الخلية (مثل الكولاجين والليمينين) لزيادة خصائص الالتصاق وتقديم إشارات أخرى مطلوبة للنمو والتمايز. معظم الخلايا المشتقة من الأنسجة الصلبة ملتصقة. نوع آخر من الاستنبات الملتصقة هو الثقافة النمطية، والتي تنطوي على نمو الخلايا في بيئة ثلاثية الأبعاد (3-D) بدلا من أطباق الثقافة ثنائية الأبعاد. يعتبر نظام الثقافة ثلاثية الأبعاد هذا أكثر تشابهًا من الناحية الفيزيولوجية والبيولوجية في النسيج الحيوى، ولكن من الصعب تقنيًا الحفاظ عليه بسبب العديد من العوامل (مثل الانتشار).

مقالات ذات صلة

مصادر

  1. مصطلحات التقانة الحيوية من الفاو - تصفح: نسخة محفوظة 15 ديسمبر 2017 على موقع واي باك مشين.
  2. "Some landmarks in the development of tissue and cell culture". Retrieved 2006-04-19.
  3. "Cell Culture". Retrieved 2006-04-19.
  4. "Cell Culture". مؤرشف من الأصل في 20 أكتوبر 201819 أبريل 2006.
  5. "Some landmarks in the development of tissue and cell culture.". مؤرشف من الأصل في 08 أكتوبر 200919 أبريل 2006.
  6. "Whonamedit - Ringer's solution". whonamedit.com. Retrieved 2014-06-09.
  7. "Animals and alternatives in testing". Archived from the original on 2006-02-25. Retrieved 2006-04-19.
  8. Schiff J (February 2002). "An unsung hero of medical research". Yale Alumni Magazine. Retrieved 2006-04-19.
  9. Voigt N, Pearman CM, Dobrev D, Dibb KM (September 2015). "Methods for isolating atrial cells from large mammals and humans". Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 86: 187–98. doi:10.1016/j.yjmcc.2015.07.006. PMID 26186893.
  10. Louch WE, Sheehan KA, Wolska BM (September 2011). "Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer". Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 51 (3): 288–98. doi:10.1016/j.yjmcc.2011.06.012. PMC 3164875. PMID 21723873.
  11. Hemeda, H., Giebel, B., Wagner, W. (16Feb2014) Evaluation of human platelet lysate versus fetal bovine serum for culture of mesenchymal stromal cells Cytotherapy p170-180 issue 2 doi.10.1016
  12. "Post - Blog | Boval BioSolutions, LLC". bovalco.com. Retrieved 2014-12-02.
  13. "LipiMAX purified lipoprotein solution from bovine serum". Selborne Biological Services. 2006. Retrieved 2010-02-02.
  14. Portela VM, Zamberlam G, Price CA (April 2010). "Cell plating density alters the ratio of estrogenic to progestagenic enzyme gene expression in cultured granulosa cells". Fertility and Sterility. 93 (6): 2050–5. doi:10.1016/j.fertnstert.2009.01.151. PMID 19324349.

موسوعات ذات صلة :